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乌蕨总黄酮体外抗氧化活性的研究

减小字体 增大字体 作者:吴晓宁1, 2余陈欢1徐静红2  来源:本站整理  发布时间:2010-12-20 9:05:01


    [摘 要] 目的 研究乌蕨总黄酮体外抗氧化活性。方法 采用分光光度法,测定乌蕨总黄酮对羟自由基、脂质过氧化的清除能力、总还原力和总抗氧化作用,并通过多元线性回归分析,考察了乌蕨总黄酮含量及其体外抗氧化活性的相关性。结果 乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化性能、自由基清除能力和一定的还原力,可有效抑制脂质过氧化,且抗氧化作用与乌蕨总黄酮含量呈正相关。结论 乌蕨总黄酮具有显著的抗氧化活性,黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。

    [关键词] 乌蕨;总黄酮;抗氧化

ABSTRACT
 Objective To investigate the antioxidant activity of flavonoids fromStenoloma chusanum(L. ) Chinginvitro. M ethods The radical scavenging, total antioxidant and reducing capacity ofhydroxy radicals and lipid peroxides by thetotal flavonoids fromStenoloma chusanum(L. )Chingwere detected and analyzed by using spectrophotometry and multiple linearregression analysis. The correlation between contents of total flavonoids and their antioxidant activityin vitrowas surveyed. Results The extracts showed strong antioxidant activities, free radical clearance and some reduction ability, by efficientlyinhibiting lipid peroxidation in a dose dependentmanner. Conclusion The total flavonoidsmay be themain active componentofStenoloma chusanum(L. ) Chingwhich exerting an antioxidative activity.

KEY WORDS Stenoloma chusanum(L. )Ching; Total flavonoids; Antioxidant activity

  乌蕨[Stenoloma chusanum(L. )Ching]为鳞始蕨科植物乌蕨的全草,又名野鸡尾、金花草、中华金粉蕨,具有清热、解毒、利湿、止血的功效[1]。其主要含有芳樟醇、松油醇和香叶醇等挥发性成分以及木犀草素、牡荆素等黄酮类化合物[2~4]。据报道,乌蕨具有抑菌、护肝、止血、解毒等作用,且安全,无毒副作用[5~7]。目前国内研究主要集中在乌蕨抗菌作用,笔者未见对其抗氧化作用的报道。为了合理利用该植物资源并确定其主要抗氧化活性成分,笔者对其进行了体外抗氧化研究,现报道如下。

    1 仪器与试药 

1.1 仪器 BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司),KQ-5000超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

    1.2 试药 乌蕨药材于2008年10月采自杭州九溪,经熊耀康教授鉴定为乌蕨[Stenoloma chusanum(L. )Ching]的地上部分,阴干,粉碎,备用。芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所(批号: 100080-20030);大豆卵磷脂购自Sigma公司(批号: F20070207);其他试剂均为分析纯。

    2 方法 

2.1 乌蕨提取物的制备 定量称取乌蕨干燥粗粉10 g,加16倍量含0. 1%盐酸的60%乙醇回流提取4 h,提取1次,提取液减压浓缩至含醇量约10%抽滤,除去杂质,加60%乙醇定容至100 mL,作为供试品溶液,备用。参照文献[8],经测定其总黄酮含量为11. 89%。

    2.2 抗氧化活性实验[9~11] 

2.2.1 磷钼络合物法总抗氧化活性的测定 在5 mL具塞试管中加入供试品溶液适量,加试剂液4 mL,加纯化水定容至5 mL,加盖,混匀,置95℃水浴反应30min,冷却后,以纯化水作空白,于695 nm波长下测定其吸光度。

    2.2.2 还原力测定 取供试品溶液适量,加入磷酸缓冲液(0. 2mol·L-1, pH 6. 6)1. 5mL及1%铁氰化钾溶液1mL, 50℃保温20min后,加入10%三氯乙酸溶液1 mL,混匀,加纯化水2. 5 mL及0. 1%三氯化铁溶液0. 1 mL。在700 nm处测定反应液吸光度值。吸光度值越大,表示还原力越强。

    2.2.3 脂质体氧化法 将大豆卵磷脂分散于去离子水中, 20 kHz超声波处理30 min,周围以冰水冷却,制得大豆磷脂浓度为0. 8%的人工脂质体。取脂质体1 mL,加入供试品溶液适量,以10 mmol·L-1乙酸铜溶液20μL催化氧化反应,混匀后放置于回转式恒温水浴振荡器上,于暗处37℃、100 r·min-1进行开口氧化,每隔一定时间,取氧化液0. 5 mL,加纯化水至5 mL,于235 nm处测定其吸光度,以摩尔消光系数ε=26 000 (mol)-1·L·cm-1计算脂质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量。

    2.2.4 抗羟自由基(·OH)作用实验 在5 mL具塞试管中加Tris-HCl缓冲液1. 0 mL,加入供试品溶液适量、亚甲基蓝溶液1. 0 mL、过氧化氢溶液0. 50 mL、硫酸亚铁溶液0. 50 mL,加纯化水稀释至刻度。用直径1 cm比色皿,以纯化水作空白,于663 nm波长处测定吸光度(A),其清除率可用下式计算:

    A样:加入清除剂后测得的反应体系吸光度值;A未损:指示剂本身的吸光度值;A损:未加清除剂时反应体系吸光度值。
    3 结果 
3.1 乌蕨总黄酮体外抗氧化活性 见表1。样品还原力和总抗氧化值均以吸光度(A)值表示。
    
      由表1可见,乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化活性,可提高羟自由基的清除率,抑制卵磷脂氧化产物的生成。

    3.2 乌蕨总黄酮与抗氧化活性相关性分析 以羟自由基清除率(X1)、还原力(X2)、CD抑制率(X3)和总抗氧化值(X4)为横坐标,乌蕨总黄酮含量(Y)为纵坐标,采用SPSS13. 0软件对表1结果进行线性关系考察,得方差分析表(表2)和回归标准残差正态P-P图(图1)。

    由表2和图1可知,P<0. 01,自变量(Xn)与因变量(Y)服从正态分布,证明乌蕨总黄酮含量与抗氧化活性之间存在显著的线性关系。进而对其进行多元线性回归分析,得回归系数分析表(表3)。

    在95%可信区间内,线性相关系数r=0. 999 5。

    证明回归方程真实、可靠,具有统计学意义。可用于替代实验点对实验结果进行分析。

由此得拟合方程:Y=-17. 453+11. 015X1+36. 458X2+35. 917X3+12. 790X4,经标准化后,拟合方程:Y=0. 152X1+0. 410X2+0. 391X3+0. 048X4。

    4 讨论 

自由基是生物体生化反应的普遍介质。现代研究表明,许多疾病如心脑血管疾病、肝硬化、癌症以及人体衰老等过程都与自由基的作用有关[12]。目前在医疗和食品领域使用较多的是合成抗氧化剂,如二丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)等,对生物体有潜在的毒副作用。黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂,具有抗衰老、增强机体免疫力等多种药理活性作用。其主要通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基,从而中断链式反应,达到抗氧化作用,且高效、低毒[13~15]。因此,越来越受到国内外医药工作者的重视。

    本实验表明,乌蕨总黄酮具有较强的还原力、抗脂质体氧化和清除自由基等作用,且随提取液浓度的增加,其抗氧化性能逐渐增强,两者在6~42 mg·mL-1浓度范围内均呈正相关。因此,笔者推断黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。

    作为临床常用的心脑血管辅助治疗药物芦丁,无论在清除自由基、还原力,还是在总抗氧化作用等方面,体外抗氧化作用均不及乌蕨总黄酮。一方面,芦丁作为黄酮苷类,其水溶性大大增加,有利于其捕捉溶剂体系超负氧离子,但同时,3-OH也是黄酮类成分抗氧化活性的必需基团,而芦丁3位成苷,降低了整个分子的共平面性[16],而乌蕨总黄酮是由多种黄酮类化合物组成的复合体,具有协同作用,因此,体外抗氧化作用强于芦丁。

    但其活性成分有待进一步研究,以期为该植物资源的开发利用及其药理作用机制的研究提供参考。

    [DOI] 10. 3870/yydb. 2010. 03. 006[参考文献][1] 江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海人民出版社, 1985: 157-158.

[2] 陶 晨,杨小生,陈 明,等.乌蕨挥发油成分分析及抗菌活性[J].黔南民族医学高等专科学校学报, 2003, 16(4): 251.

[3] 蔡建秀,吴文珊,吴凌云,等. 22种药用蕨类植物的总黄酮含量的研究[ J].福建师范大学学报, 2000, 16(4):63-66.

[4] 吴瑞宁,黄慰生,蔡建秀,等.蕨类植物中总黄酮的提取[J].福州大学学报, 2003, 31(6): 738-741.

[5] 蔡建秀,黄晓冬.乌蕨总黄酮及水提液的药理实验[J].

福建中医学院学报, 2004, 14(1): 13-14.

[6] 陈 明,陈金秀,段 萍.乌蕨的毒理学系列研究[J].中医药学

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